[求救] CHIP sonication 急

[starjim (Jim)]

目前在做chromatin IP

今天收完細胞後加入formadehyde完再加入glycine

之後用PBS wash細胞

接著加入lysis buffer完

用SONICATOR 3000; Misonix進行sonication

條件是:on 10sec  off:30 sec  pulses:10    12W


跑完膠後感覺切的不是很好

但要等到明天才能跟老師討論

所以不知道可不可以把它放在-80度C冰箱儲存O/N

因為抗體貴所以不敢先直接加抗體放O/N


現在擔心的是放-80是否會使protein crosslink產生變化

進而影響我要做的後續分析




感謝~非常急


謝謝高手回答






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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 203.71.94.31
→ Ianthegood:不必放-80吧 4度就可以了吧 有加protease inhibitor?
→ Ianthegood:-80 crosslink不會有事不過怕你的DNA會受傷
→ starjim:我有加~
→ starjim:DNA不能承受-80嗎?
→ starjim:LYSIS buffer中有加入PMSF&Na3PO4&leupeptin
→ Ianthegood:freeze/thaw會斷 不過反正你ip都要搖o/n了表示
→ Ianthegood:stability不會太慘才對
→ Ianthegood:我做的是rip 震完分裝進-80 不過你如果沒有要長期儲存
→ Ianthegood:應該沒差吧(菸)
→ starjim:我剛剛把它放在-20了~應該可以吧= =