[求救] 有人分離過人類單核球細胞MNC嗎?

[fablissful ()]

因為實驗上的需要

因此我需要抽取人血並分離其中人類單核球細胞 (MNC:mononuclear cell)

並配置condition medium

不過實驗室裡做過的學長姐都已經畢業很久  應該也忘記的差不多了

雖然看的protocol

不過實際上還是有許多問題不太了解

想請有經驗的大大能夠給我一點指點

如果可以是否可以告訴我妳們當初是如何採血的?

一次都採多少去分離呢?  針頭是用軟針嗎?

另外

因為單核球細胞屬於懸浮性的所以用的flask是用一般的75T培養就好嗎? 還是要co膠?




還有許多問題><

如果有大大願意請多告訴我一點

感謝  (跪拜)

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◆ From: 140.120.104.95
推 yllai1029:就用一般的針抽就好0.0我是抽一管10ml於Heparin管
→ yllai1029:大概會有10^7的細胞數 不過我通常抽出來後就直接加藥
→ yllai1029:所以培養我不清楚 不過分離出來之後大概活不到一個禮拜
→ melanoma:以Ficoll-Hypaque離心分離，取中間白色懸浮層分出再用pbs
→ melanoma:以RPMI1640medium+FBS 培養
→ melanoma:可懸浮培養，若培養後細胞有觸手伸出代表已分化為DC或Mac