推 crazybrian:重新transform看看~ 05/03 22:47
推 satantaco:跑膠前的蛋白質定量無誤?每個land的濃度是否一致 05/08 23:26
最近將前人的凍菌進行IPTG誘導,但我誘導3次結果都不一樣
第一次結果:1mM IPTG誘導,5hr,37度 誘導成功,目標位子有很明顯的band
第二次結果:1mM IPTG誘導,16hr,37度 control比誘導的表現高
第三次結果:1mM IPTG誘導,5hr,37度 control比誘導的表現高
1mM IPTG誘導,16hr,37度 誘導成功,目標位子有很明顯的band
PS.3次凍管皆相同
另外我也有拿不同sample進行1mM IPTG誘導,5hr/16hr,37度
結果 control比誘導的表現高
另外.將一己定序確認無誤之plasmid送至BL21 competent cell (實驗室自行製備)
transformation後挑數個colony進行1mM IPTG誘導,5hr,37度
但跑膠結果發現,control竟然比誘導的表現高
請問是不是competent cell的問題???
或者蛋白表現過高,反而抑制了生長??
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