[求救] 關於transfection前細胞處理問題

[hahaiamweiwe (WiWi)]

最近在做transfection的實驗，要將miRNA送入細胞
我用的產品是QIAGEN的Hiperfect transfection reagent
http://ppt.cc/-h_l
按照protocol的前處理，細胞計數完種入6-well plate，(我的細胞是HCT116，貼附型
大腸癌細胞，之前養一陣子的經驗，很耐，非常會長，平時都養在6mm dish)
隔天(18~24hr，我是22小時)transfection前2小時，換入新的DMEM，但是問題就
一直出現在這一步，我換了DMEM後，觀察一下了細胞，恩，沒事，於是我就去配置
transfection的試劑，30min後回去看，細胞漂了....我重複做了4,5次都一樣，
我都是很小心的慢慢吸掉與加入DMEM，但發現漂的地方通常是加入DMEM的地方，
我已經用10s加1 ml的速度慢慢沿著壁加進去了說QQ
之前養的經驗並不會這麼容易就漂，但如果多放幾天細胞就會貼很緊，但我怕放
太多天對要transfection的細胞DATA有所影響。

1.請問為什麼之前用6mm dish養時貼很緊，現在用6-well就貼不緊?(6-well plate
換過兩個廠牌都一樣)

2.如果多放幾天再transfection對DATA是否會有可信度的影響?
這問題困擾我很久了，6月要趕畢業這實驗一直做不起來我快抓狂了...QQ


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◆ From: 140.124.52.227
→ blence:protocol並沒說要換DMEM吧?
推 joseph103331:為什麼要換medium?
→ blence:如果認為60mm不會飄，那就直接拿一盤測試吧，免得一直浪費
→ blence:6well,其實你這是culture問題而不是transfection
推 Realthugz:通常mixture直接加進去吧 反應完後之後再換吧?
→ hahaiamweiwe:我這裡有拿到其他牌的reagent,上面是說要換新鮮的@@"
→ hahaiamweiwe:所以一般不用換MEDIUM嗎?因為我打去技術部他們都說要
→ blence:用其他牌的reagent卻給Q牌的http link,是給板友看心酸的嗎?
→ hahaiamweiwe:我都同時做的,只是順便試試它牌,且客服也跟我說要換
→ hahaiamweiwe:Q牌的客服給我的建議是換medium,但一直有問題
推 vancent:TRANSFECTION前換MEDIUM是大忌...