推 tsubasawolfy:隨便設計個RE site primer然後dimer起來接上去就好了 05/08 00:07
→ joseph103331:樓上的方法....好棒啊!! 我也要學XD 05/08 09:06
→ jabari:真是奢侈的夢想 XD~~ topo耶... 05/08 16:49
→ U0:blunting and blunt end ligation 05/08 23:22
目前使用的質體是pcDNA3.1/V5-His-TOPO
實驗上除了接上想ligase的片段外
還需要空的質體 但因為兩端突出的都是T
在接合外來片段都做得蠻順利的
唯獨空質體試了幾種方式 目前都還沒成功:
1. 在原本應該加入外來片段的步驟 改加入DW
2. 改成加入dNTP
想請教版上有沒有人試成功過~ 能不能指正我那邊出了問題O_Q
或是那裡可以改進再試試看!
或是..有沒有人有pcDNA3.1/V5-His-TOPO這個質體(要完全沒插入外來片段的!)
(或是TOP 10 E.coli內含這個質體也可!)
我可以附上一杯星巴克(或是價位相當的 任君挑選~)當作答謝!
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