推 mesenchymal:你的protein 跟別人positive control的同細胞嗎? 05/08 22:54
→ barbarlas:恩 只是不同的treatment 05/09 11:25
→ lail:你的treatment會不會無法使該蛋白質磷酸化? 05/10 00:21
→ mesenchymal:那你的sample沒有treatment的也染不到嗎? 05/11 13:17
我要染的蛋白為 Myosin Light Chain pS19
大小大約17kD
我的作法是將cell lysate收下來後直接加入SDS sample buffer煮五分鐘
之後跑膠和tramsfer都沒有問題
blocking是用1%BSA 2hr
一抗 overnight
二抗兩小時
有用別人的sample當positive control
結果別人的sample有染到
我猜是我sample的問題,但我其他的蛋白的磷酸化染得到
我是用1XRIPA buffer(有加phosphatase inhibitor) 去收lysate
定量完後加入SDS sample buffer
這蛋白我實驗常需染的蛋白
我已經不知道該怎麼辦了
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