[求救] real-time PCR 選到絕對定量?

[nightA (in dispute)]

不好意思有幾個問題想請問大家



1.我使用ABI 7500 機器上Real-time PCR

結果不小心選到絕對定量@@(本來應該要用相對定量)

但我從頭到尾也沒有設過甚麼原始濃度等等之類的東西

請問這樣機器幫我算出來的CT值是可信的嗎?orz


2.另外想問CT值的可信範圍是不是大約在15-35個Cycle左右?

3.我是抽動物組織的RNA翻cDNA後上real-time

  我同樣的實驗會重複兩到三次,比如二月犧牲一次,三月犧牲一次
  (一樣的實驗,不同批老鼠)

  請問我可以二月的組織上一次qPCR,三月的組織上一次qPCR

  然後把兩次結果加在一起做成一張圖嗎?

  畢竟想早點看到結果,可能二月份的做出來有差異

  然後三月份的做一次,兩次結果加在一起這樣

  還是應該要二月跟三月抽出來的的RNA一起上real-time比較好?
  (但是這樣well好像不夠)

  謝謝大家了



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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.112.120.31
→ dota01:可以裝SDS2.4 把AQ轉RQ
推 qiet:1.沒差 2.一般會落在這裡面 但要確定你的反應在>30 cycle還是
→ qiet:穩定的
→ qiet:3. 可以加在一起 只要你每次轉RT取的RNA量一樣 使用的reagent
→ qiet:也都一樣 但可以在跑下一個月的時候放幾隻前一個月的當對照
→ qiet:確認批與批之間操作是否一致
推 batatas:CT值的可信範圍看曲線比比較準