[求救] Raw264.7培養問題

[babachi ()]

請教養過Raw264.7的善心人士

細胞來源:食科所

培養基:90 % SIGMA 的 DMEM with 4mM L-glutamine, 4500 mg/L Glucose 另加

       3.7 g sodium bicarbonate ,10% fetal bovin serum, 1% P/S

問題:1. 每次passage,用medium沖細胞下來,medium顏色從黃色變成粉紅色(變鹼?)

     2. 最近解凍完胚了約兩次後,細胞全活化了(長腳,沖不下來)

     3. 細胞數密度會影響這細胞活化嗎?

被這細胞搞得有點精神衰弱,急需希望有經驗的善心人士幫忙

拜託各位了 感恩

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 203.71.94.5
推 lydiayeh:這株細胞我養的時候是10%FBS/DMEM 但沒外加Glucose
→ lydiayeh:細胞密度不能太大  因為長非常快 大概兩天就跟尿一樣XD
→ lydiayeh:我之前會把整個配好的medium再過一次濾杯 確保無菌
→ lydiayeh:會長腳要嘛是有汙染要嘛是代數太多囉 希望有幫上忙
推 mandible:你細胞density太高了!這個細胞長很快!一多就被活化就長腳
→ lydiayeh:推樓上  細胞數過多也會長腳>"<
→ babachi:謝謝大家的意見~大約多少要種多少呢~我是10mm dish養
→ babachi:大家是用刮勺繼代培養比較多還是用medium沖洗下來呢
→ ashiniii:想問一下哪來的information說可以沖細胞下來pass?
→ ashiniii:我們都是用刮的, 被activate大多是污染了, 不能用了
推 cyuchien:啊~~之前給我的實驗室交代要用沖的說...用刮的會長腳..XD
→ cyuchien:10%FBS+90%DMEMHG+1%glutamin, 1拆5去分盤
→ ashiniii:我們用刮的從來沒activate過,去查ATCC or BCRC你就知道了
→ ashiniii:基本上都是要用scrap, 少數人用Tyrpsin但細胞會越來越黏
→ ashiniii:但據我所知食工所pass這株是用沖的XD(用tip
→ ashiniii:但是也不會像你這樣@@
→ babachi:細胞型態要變成怎樣才真的不能用?我的是會像眼睛一樣~少許
→ babachi:又細又長~T^T
推 ashiniii:有照片可以看嗎@?