[求救] knockdown後 RNA下降 protein沒變

[WILLIJOY (KUMO)]

我利用中研院RNAi core定智客製化病毒後,將keratinocyte的某基因knockdown後

測其RNA表現量,KD後的細胞,該基因表現量只剩不到一成(多次結果都相同)

可是PROTEIN看起來卻完全沒有下降

確認抗體(全長)及PRIMER序列(兩個Varien都有被KD )也都沒問題

請問是哪裡出了問題???  有什麼原因呢???

懇求意見  大謝

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 163.25.87.42
推 chench0710:你要發現大東西了！加油XD
推 icome:確定蛋白偵測技術(e.q.Western blot)沒有問題?
推 bioowen:有沒有可能是QPCR的primer efficiency不好??
推 mesenchymal:protein degradation速率太慢? 所以你跑western測
→ mesenchymal:到的是原本就存在的protein
推 Realthugz:protein turnover 比較慢?
→ Realthugz:跟樓上說的基本一樣
推 aceliang:half-life
推 NMLEG:可能基因表現還沒反應在蛋白質上 再等久一點看看
推 tchan:Infect完久一點在收(48-72小時後)