推 guavataro:vibrotome....好懷念的機器 05/19 20:20
→ GPMorgan:Vibrotome很讚~ 組織不容易變形，掃confocal圖又漂亮 05/19 20:41
推 vandia:推ibrotome... 05/20 08:38
※ 引述《kakaman (日子過的真快阿)》之銘言：
: 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
: 以方便板友幫您追蹤問題
: ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
: 想請問一下
: 冷凍切片大家都切多厚
: 最近老闆要求我切30um...因為這樣可以看到更多的神經細胞與fiber
: 我有做profusion,然後浸泡在PFA中overnight
: 接著用30%蔗糖(in PBS)脫水,接著以乾冰做包埋
: 隔天便進行切片,
: 切10~15um還ok,再切厚一點組織就裂的很嚴重
: 難道要將溫度再調高幾度切嗎?還是有其他方法小撇步可以切到30um?
: 可以請有經驗的前輩給我一點意見嗎?
: 謝謝大家~~
一般冷凍切片都是切20um以內
個人經驗，太厚的話，除了你說得容易破損，後續染色也很容易掉片。
你要切厚，掃confocal的話，其實很多人是用vibrotome，震盪切片
(機器也相對便宜，大概25萬)
大概可以切50um~200um
掃神經組織，z-stack 疊起來會很漂亮。
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