[求救] PCNA stain 冷凍切片失敗

[GPMorgan (駒霹摩根)]

嗨，各位版友好

小弟用冷凍切片來染PCNA，希望定量細胞複製的狀況。

所用的樣本是斑馬魚的冷凍切片。


但是一直染不太出來，很多雜訊，而且訊號都不是在細胞核 @@

步驟大概是室溫4%PFA固定30min => Wash => 0.5% T-100 30min

Wash x3 => 一抗1:100 四度ON

Wash x3 => 二抗Dylight 488 1:200 一小時

Wash => DAPI

不知道有沒有人能有什麼建議? 萬分感謝

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.235.72
→ ray289:螢光顯微觀察收光時間多久? 有沒有同時做negative control?
※ 編輯: GPMorgan        來自: 140.114.235.72       (05/21 23:31)
→ GPMorgan:2抗only是沒訊號的~ 目前也還在找其他可能原因
→ vandia:問個沒寫清楚的地方:你0.5% T-100是泡在PBS裡沒錯嘛?
→ GPMorgan:恩~ 是在PBS裡，我懷疑是要做antigen retrieval