[求救] FPLC的吸光值

[higaaoi ()]

事前將海底生物中的蛋白質取出

先用FPLC做分離

有試過一些注射量，不會嚴重改變圖形的前提下

注射比較高的蛋白進去

後來老闆竟然說為什麼OD280 nm怎麼高到2200 mAU 左右

合理的範圍最高在1700 mAU左右才是，最理想是1500 mAU

然後說要稀釋重跑一張圖比較好


他又沒有要定量，而且各Fraction也不純也談不上定量

再說每種蛋白定量的線性範圍可以一視同仁嗎

他是用分光光度計的標準看待FPLC經由column後測量UV的值......



不知道大家看法如何

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 111.240.95.211
→ trumpet:過column後測UV280nm，和分光光度計標準你覺得有何不同??
好像沒不同，原理是一樣，但兩者的數值是否因不同機型，不知道是否能轉換

是對老闆堅持數值不可以高於他講的，感到有點疑惑

分光光度計是知道1.5-2.0 AU算是定量用的最高值了，

接LC的UV detector也是嗎？
※ 編輯: higaaoi         來自: 111.240.95.211       (06/19 23:44)
推 olpo:數值過高或過低會降低偵測的準確性   但是其實不會差很多
→ olpo:從以前看過的書來講  理想值附近的準確率是99.9%
→ olpo:超過理想值好幾倍準確率只剩99.5%
→ olpo:以這些蛋白質實驗來講  其實差沒多少  所以不用擔心老師講的
推 sandcu:感覺沒差耶@@