推 spirithorse:感謝 06/22 11:24
推 puec2:看就知道沒夾緊啦 圖畫紙放幾張？ 06/23 03:07
→ spirithorse:我放三張..看來還是不夠,下次會在多加一張PVDF 06/23 23:19
→ puec2:還有一種可能 是你的buffer有問題 gel 在transfer中變形 06/25 16:49
推 spirithorse:謝謝!transfer我是跟其他人一樣的配方,下次我會染gel 06/26 19:21
※ 引述《spirithorse (咩)》之銘言：
: 標題: [求救] transfer 糊掉
: 時間: Thu Jun 21 17:38:20 2012
:
: traget protien: 10~15KDa (in 12% sds gel)
: transfer condition: 0.22 um PVDF, 400mA 1hr
: 因為一直都壓不到我的protein, 下圖是將PVDF染Ponceau S後的結果
:
: http://ppt.cc/~mDh
: http://ppt.cc/StAV
:
把你的膠也拿去染CBR或者是一些商業配方
如果還有殘留
且殘留也出現這樣的問題....
就是你的膠沒鑄好
可能是有些漏液
如果沒有這情形...
我自己的經驗是Buffer過熱造成
或者是...沒夾緊也有可能
另外
Western blotting會因為你的膠的大小、membrane大小、乾溼式、注入多少蛋白
甚至連帶buffer溫度都會差很多
可以提供更詳細的資料 這樣會比較好判斷
題外話
我自己用hoefer 10*8cm 開450mA (濕)
transfer tank丟cooler 開-5度 overnight(~20 hrs)也都沒過頭過 (15kda以上)
甚至都還有可能殘留 (20ug~37.5ug)
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