[求救] 細胞在顯微鏡下拍起來感覺有氣泡?

[yuasa (XD)]

以螢光顯微鏡拍細胞(hela cell)時

在phase contrast的鏡頭下常會看到不明的 類似氣泡狀的東西

體積並不小有細胞的1/5或更大 而且都是粘在細胞上的

有時也有點像細胞漲起來一粒那樣

我猜想是以4% paraformaldehyde fix 或染hochest dye後才出現的

因為之前直接拍沒有處理的活細胞並不會有這種情形

不知有版上先進遇過類似情形嗎?

該怎麼改善呢?

謝謝

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◆ From: 163.25.89.5
→ vandia:有沒有圖可以放上來?
→ yuasa:http://ppt.cc/fBdv 氣泡有時候size會更大些
→ femto:blebbing,細胞不健康
→ yuasa:但是不fix直接拿dish去看並不會有耶 是fix+染核後才會出現@@
→ vandia:固定的時候有降溫嘛？
→ femto:1.blebbing的速度蠻快的
→ femto:2.你是看同一盤,fix看是健康的,fix有問題嗎? 還是看不同盤?
→ femto:2.你是看同一盤,fix前是健康的,fix後才有問題嗎?
→ yuasa:不是同一盤，不過先前做的從沒fix跟染核就沒有這情形，而後
→ yuasa:來為了染核而fix之後，幾乎都會有這問題發生= =，我下次fix
→ yuasa:前會先看一下情形，btw速度蠻快是多快的呢?我treat我的藥物
→ yuasa:5分鐘後就拿去fix 15 min，之後染hochest約5 min，時間蠻短
→ NKTcell:染染看hochest  染得到代表時核酸類物質 那就是汙染了
→ NKTcell:我猜應該是汙染到微生物
→ femto:建議留意細胞生長速度,細胞不健康只能解凍新的
→ yuasa:hochest非常地乾淨，其他的dye染起來也是完全沒問題
→ yuasa:同一批的細胞我都持續地繼代和做其他實驗(上flow)，都正常