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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 我在萃取裸鼠皮膚的RNA 但是遇到的問題是皮膚RNA degrade 得很嚴重 若是傷口皮膚則degrade 得更嚴重 據說formamide http://en.wikipedia.org/wiki/Formamide 可以穩定RNA 因此formamide 在RNA 電泳實驗中可做為Stabiliser 想請問的是.... 在使用Trizol 方法萃取RNA 後 在最後回溶的步驟 若用formamide 來回溶RNA 以期達到穩定RNA 的效果 formamide 是否會干擾後續RT 進行? 會問這問題是因為最近要做裸鼠皮膚傷害的microarray 但RNA degrade嚴重難以得到品質好的RNA 因此查到formamide 能穩定RNA... 感謝分享~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.160
cmublue:想知道+1 但是如果後續要轉RT的話不知道會不會有影響 07/23 16:03
Ianthegood:RNAse inhibitor 07/23 16:35
mzac1b:在回溶RNA 的溶液添加 RNAse inhibitor? 07/23 17:59
mzac1b:還是直接用滅菌過的DEPC水效果就很好了? 07/23 18:02
mzac1b:其實是我的老師要我用formamide 溶 但我懷疑RT 能做嗎... 07/23 19:00
qqmango:想想蛋白質碰到福馬林會怎樣,特別是RTase這麼敏感的酵素 07/23 21:40
RickyKckao:皮膚上有很多RNase 主要是它們造成RNA degrade 07/23 23:33
mzac1b:formamide是甲醯胺 但我不知道formamide會不會對 07/24 10:43
mzac1b:RNA 或 RT 造成甚麼影響 07/24 10:43
mzac1b:R大之意是 意味萃取到最後步驟用甚麼溶就沒差了? 07/24 10:45
RickyKckao:從一開始萃取RNA時RNase就一直在作用了 試試看在第一步 07/24 12:45
RickyKckao:lyse的溶液就加inhibitor試試看 07/24 12:46
RickyKckao:然後操作盡量快 維持低溫 降低RNase的作用 07/24 12:47
RickyKckao:最後回溶的溶液是不用加inhibitor 07/24 12:49
qqmango:啊看錯了,抱歉XD 07/24 21:08