[求救] plasmid DNA & Western blot

[tabo1989 (向日葵大燦笑)]

想請問大家

(1)  我用Genebank 的miniprep抽plasmid DNA

跑DNA膠看起來不純(多在我要的產物上方有雜band，8000-10000 bp)，
且OD260/280 都大於2
請問該如何改善?


(2)   請問當western blot(16 % ) 壓片出來發現26 kDa以下的band都是糊的
(上面大分子band很sharp，看起來沒問題)
我覺得應該是跑膠時過熱導致，但不知道是running or transfer有問題，
請問該如何改善?


(3) 跑SDS PAGE，定福特還是定電流會有差別嗎?哪一個條件比較好?



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◆ From: 140.112.121.97
→ RickyKckao:(1)那有可能是supercoil form的plasmid  下次確定酒精
→ RickyKckao:都去除之後再elute看看OD值
→ RickyKckao:(2)試試看把整個tank放在碎冰裡呢?
推 BarryJones:(1)可以跑膠之後將有目標DNA片段切膠再做一次elition
→ BarryJones:(2)蛋白質條帶擴散應增加電壓
→ BarryJones:(3)一般來說:15mA約10分鐘(過上層後),30mA約30~40分鐘
→ BarryJones:(3)但也有實驗室固定電壓
推 lovenainai:你 miniprep 搖大大力了吧 才會有 gDNA 汙染