→ blence:如果重接還是會這樣,就得考慮這Ecoli不喜歡這顆plasmid了 08/26 04:58
→ chl20020933:GG了, 用site directed mutagenesis變回來 08/26 21:40
最近在做Cloning...
vector和insert是以Msc I和Hind III進行enzyme digestion
Msc I會將DNA切成blunt end，辨識的切位為TGG CCA
有成功接入insert，定序之後insert的序列是完全正確的，
卻發現在Msc I的切位上多出了兩個GG
也就是說序列變成 TGGGGCCA，
後來我又進行了Msc I的enzyme digestion，
發現可以切的動，但是效率很差。
而且又以reverse primer定序一次，發現仍然是多了兩個GG。
而且我同時送了兩個plasmid都得到一樣的結果。
這種發生的機率好像低到可以去買樂透了~囧。
想請教各位，
這樣的結果是不是表示有非常大的機率的確是多了兩個GG？
其實已經有重做的準備，
但是還是想知道為什麼會有這種情況發生，
不知道大家能不能給我一些意見。
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