[方法] ligation

[tabo1989 (向日葵大燦笑)]

請問做ligation時一直挑到空的vector要怎麼調整condition? 我的條件是（1）vector+insert=100 ng(2)(vector/mw):(insert/mw)=1:3,1:5,1:7我都試過了


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◆ From: 49.215.249.144
→ soom:加做alkaline phosphatase (CIP) 可能有幫助
→ RickyKckao:可以試試ligation的時候加polyethylene glycol (PEG)
→ jihyang:我用 alkaline phosphatase 做出來的clone都怪怪的說...
→ jihyang:vector+insert =1:3 (total 200ng)4度C ligation O/N 試試
→ jihyang:可能就最後挑多一點吧.. 之前經驗 一次挑了25個 一次7個就
→ jihyang:有了...  頗運氣的 ~ 可以找新手 會有新手運XD
→ tabo1989:我有加CIP,但看起來都不work.
→ tabo1989:都放室溫下，overweekend
→ tabo1989:哈哈哈！挑好久（（淚...
→ spirithorse:ligate過周末的話還是放4度比較好,有跑膠確定vector
→ spirithorse:有沒有切乾淨嗎? plate上的colony是否爆炸多(plasmid)