→ utadalove:stripping完有上substract壓片看看有無訊號嗎?! 09/16 11:01
推 Kunzite:Stripping方式？ 09/16 11:43
推 hangzer:與其stripping 不如多跑一片膠分開壓壓看? 09/16 14:52
→ poulnew:stripping 65oC /15 min 09/16 15:31
推 lovenainai:不要 strip 偷懶 做了四次反而更浪費時間跟耗材 09/19 12:54
小弟是新手
我跑的total Erk 一直有一個很奇怪的趨勢
但是同一批sample帶我的學姊跑就很正常
已經做了四次獨立的實驗http://ppt.cc/zGp7 (4th data not shown)
想上來請教各位有可能的原因
以下是我的做法概述
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8%膠 60V 3小時 / transfer 100mA 50min
先壓p-Erk (cell signaling,1:2000,mouse) O/N
stripping 15 min,wash 10min for 3times, blocking (5% milk) 1hr
total Erk (cell signaling, 1:2000 ,rabbit) O/N
我自己的解釋是 stripping 沒完全 造成total Erk抗體無法binding
但是有可能嗎?? 因為我也想不到原因了 畢竟都跑了四次
禮拜一要進行無奈的第五次實驗 希望各位能夠救我一下
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