Re: [方法] 跑SDS gel % 數選擇

[jykonv23 (如果有那天)]

※ 引述《spirithorse (咩)》之銘言：
: 我的目標蛋白大約在10KDa左右
: 所以使用15% SDS gel
: 但是做WB時只需要看actin (42KDa)跟目標蛋白(10KDa)
: 而15%的gel只有大概在30KDa以下的marker會分很開
: 於是我有問題想請問...
: 因為也不是要區分"很多"10KDa左右的蛋白
: 那是否可以跑12%或10%的gel呢??  (8%我看marker 15-10KDa分不開)
: 總覺得不知道哪裡怪怪的~


手工配10%/15%的下膠

配15%的膠其中H2O的部分裡面含甘油20%


舉例
               30 % acrylamide stock      16  ml

               H2O                        8  ml(with 1.6ml甘油 )
                                          ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
              10% SDS                     8  ml

              10 % APS                    160 μl

              TEMED                        15μl

假設你的下膠體積是10ml，10%和15%的比例可以是1:1也就是各5ml

先把15%的膠注入5ml後，再把10%的膠用非常緩慢低速度沿著玻璃壁注入

你可以看到膠會有分層，或者tip尖端垂直抵著玻璃片沿著玻璃片由左向右移動

同時也是緩慢滴注入10%的膠，重點在於注入膠的速度避免混合即可

注完後你會看到因為膠對光的折射率不同，出現一條性感帶

多練幾次就可以抓到訣竅了




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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 114.25.62.79
→ blence:為什麼要加甘油呢？分批凝就好了,另外配方少了Tris-HCl
→ blence:以42,10kda這個例子,用10%+15% 1:1能會讓actin跑到15%變醜
→ blence:改成12%,16% 1:1或10%,17% 5:3比較能讓42,10kda分佈在兩層
推 spirithorse:第一次看到加glycerol的做法!   學到,謝謝^^
→ Invec:加甘油最早是在tricine-PAGE裡，用以增加膠體強度而已
→ jykonv23:配方是隨便舉例，主要是我用甘油取代20%的水，10%15%
→ jykonv23:的比例可以改不一定要1:1，因為我不是分批凝所以15%加
→ jykonv23:甘油比較穩一點