[求救] 關於RNA照膠

[otneiv (oleic)]

想請問一下 當我萃取出total RNA之後 為什麼跑膠(還是用跑RNA專用的膠)的結果卻看不
到?
可是將其SAMPLE轉成cDNA之後 跑膠 卻可以看到有smear的現象

我目前的實驗流程:
 取血離心→取中間層 (白血球 血小板)→用 RNeasy mini kit 萃取RNA
  (5 CC)     (每管50ul)

利用Formaldehyde-Free RNA Gel Kit 來跑RNA電泳 (SAMPLE量為5uL)
跑膠的時間為15分鐘
(連MARKER都跑不出來 Marker是使用1Kb DNA ladder (同樣使用染RNA的 loading
buffer)


可是使用跑DNA電泳的膠 以及SYBR Green I來染 卻可以照出有兩條明顯的band (雖然很
淡)

照膠的機器為Vilber Lourmat出廠的
 http://www.vilber.com/products/Bioprint1.html (應該是這台)

麻煩大家 幫我想想看有什麼原因了!! 謝謝

因為也做了不下十次的測試 沒有看到過任何一次 總不可能手殘了十次吧(冏)

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 203.71.2.84
→ otneiv:抽出來的RNA 經過nanodrop的偵測 260/280皆在1.70~2.1內
→ soom:看起來像是染RNA的dye有問題
→ elite2:(SAMPLE量為5uL)，重點是裡面有多少RNA呢？
→ otneiv:5~30ng/ul 不等(nanodrop所測得的數據)
→ otneiv:染RNA的dye 已經包含在loading buffer裡了
→ otneiv:http://ppt.cc/dDB4 此為RNA GEL的PROTOCOL
→ Ianthegood:應該是dye的問題+1 不過重點是你要幹嘛吧
→ Ianthegood:如果只是要跑check 一般的膠多放點EtBr就看得到了
→ otneiv:因為實驗室是第一次做RNA項目 老闆想試試看 以實驗室的情況
→ otneiv:是否可以做RNA相關的題目 因此想利用RNA的膠來確認看看 所
→ otneiv:萃取的RNA結果如何! (雖然OD 260/280幾乎都有在1.8~2.1間)
→ otneiv:EtBr的話 實驗室好像也沒有在用 而且照GEL的PROTOCOL 應該
→ otneiv:是使用他所提供的loading buffer就能染出來的!
→ otneiv:我會再問問看廠商dye的相關問題  感謝你們的幫忙!!
推 tommy770726:不清楚最後再泡個ETBR 10分鐘就好了
→ tommy770726:還有原PO的dye有加甘油嗎? 沒有甘油RNA會飄掉喔