→ goshr:再請你學姐做一次, 就知道是你的問題還是kit的問題了 ^^ 09/24 09:14
推 d200190:請學姊看你做一次，看是不是有加錯還是有氣泡 09/24 15:11
推 cutilis:sodium zide好像會影響HRP. 看一下廠商的troubleshooting 09/24 23:04
我最近在測mouse血清的IL-1Ra
但是Standard吸光值越測越低 不知道為何QQ
廠商只有賣coating好一抗的 所以步驟直接從加sample開始
步驟:
加standard, sample 2.5nr→PBST洗4次
加二抗 1hr→PBST洗4次
加HRP 45min→PBST洗4次
加TMB 30min→加 stop solution 測OD450
然後我第一次pretest時std最高濃度(2000pg/ml)有1.3左右
第二次剩下0.6
第三次剩0.3(這次是用新一管的STD)
接著懷疑可能是我在溶解STD時沒先離心把管壁上殘餘的離下所以濃度不對
(protocol有說配STD前要先briefly spin)
然後買了新kit
9/20學姐先幫我測試STD 最高濃度(2000pg/ml)有3.0
雖然畫出來曲線後面已經平掉了 但表示STD很健康
9/23我做的STD卻只有0.5 QQQQQQQQQQQQQQQQQ 但是sample的部分都有1.多
稀釋STD時我都有vortex+pipet
我實在是不知道哪裡出了問題QQQQQQQQQQQ
我真的覺得我被鬼打到了
之前練習IL-33, IgM, TNFa standard都有到1.多
稀釋方法也都差不多....
可以煩請各位前輩給我點建議嗎QQ?
kit很貴我卻一直失敗.........QQ
謝謝大家!!!!!!!(跪
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※ 編輯: greenpeace29 來自: 175.180.116.108 (09/23 20:09)