作者mongi (大體老屍)
看板Biotech
標題[求救] RNA gel 有問題
時間Mon Oct 22 23:59:47 2012
各位晚安 小弟新手今天第一次抽RNA
抽的是cell monolayer 完全遵照protocol做
經過數次離心要去測濃度
值437ng/ul A260/280=2.03 A260/230=2.03(好像不能高於2?)
為了知道自己抽的RNA是否夠純我去跑gel 50V 30cc 1.5%
照下來發現 18S很清楚 但28S沒看見
想請問大家這樣狀況的原因是什麼
我的想法會不會是sample汙染 或是有抽到DNA
2. 做agrose膠時 染劑本來加2-3ul 結果我加了20ul (整個很黃)
有影響跑膠嗎 我照下來似乎沒什麼差別 (我們不用Etbr)
3. 照下來感覺雜點有點多 不知道是溶不完全還是膠台沒擦乾淨
懇請大家幫忙了 也祝各位實驗操作順利
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◆ From: 140.116.133.119
※ 編輯: mongi 來自: 140.116.133.119 (10/23 00:01)
推 aceliang:內染？我怎麼記得dye都是跟denatured sample放一起？ 10/23 00:34
→ nike77114:應該是安全染劑 10/23 01:44
→ nike77114:如果是gDNA汙染會出現在最上方 10/23 01:44
→ nike77114:你marker情形如何? 10/23 01:45
→ Ice9:你是說4.5kb的位置上完全没有訊號？ 安全染劑也只是相對安全 10/23 10:37
→ huuban:是不是RNA降解了？你們有跑marker嗎？marker正常嗎？ 10/23 12:09
→ mongi: 實驗室沒有rna marker,所以直接load sample 10/23 12:14
→ Ice9:就算没有RNA marker，用 DNA marker 也是能稍微定位...... 10/24 12:19
→ huuban:再抽一次吧，說不定樣本早就掛了 10/24 14:29
推 arsene1989:你電泳跑多久? 10/25 14:44