[求救] co-transfection

[nhxcyge (人生就像個不可逆反應)]

請問有做過co-transfection的各位，

近期我使用MCF7作transfection，發現只有其一會transfect成功，

亦即plasmid A和plasmid B中，我用western確認，只認到plasmid A

作出來的protein，卻沒有plasmid B。

這二個plasmid的vector是相同的(pcDNA3.1)，protein大小差30 kDa左右。

目前有二個想法：

1、先transfect其中一個plasmid，過一段時間後(~8 hr)換medium，再transfect

   另一個plasmid，再等48 hr。

2、作不同ratio的搭配，原本A:B=1:1，改成1:2, 1:3的組合，抓condition。

或是各位有什麼可能的解決方案呢？？謝謝！

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◆ From: 140.114.237.129
推 williamyang:把其中ㄧ個的backbone換別的呢?
推 joseph103331:各自transfect會成功嗎?
→ nhxcyge:我有單獨transfect plasmid B，可以成功。
推 tsubasawolfy:換backbone吧
→ heavenfree:有考慮過用bicistronic vector嗎?
→ nhxcyge:我現在先試我的二個方案，再不行再試各位的建議T^T