[問題]關於蛋白純化

[ohyeh1021 (史前巨熊)]

最近剛好在純化蛋白

實驗室的protocol是

利用nickel column先做初步的純化

再使用gel filtration做第二步的純化


第一個問題是

第二步的gel filtration會不會使sample"流失"很多?

第二個問題是

爬文有看到說利用TALON抓His-taq,可獲得純度較高的Protein.

那是否就無需再做gel filtration?

第三個問題是

nickel純化完的雜band是否與表現系統有關?

原Po目前使用的是insect cell expression,gel filtration後可以看到其他的peak

而使用E coli expression,gel filtration只有單一的peak


謝謝大家的指導

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◆ From: 140.109.65.186
→ trumpet:1. 看你的GF column大小，愈大體積會損失愈多
→ trumpet:GF完後濃度也會被稀釋掉，如果需要濃度高點，可能還得濃縮
→ trumpet:2. 作GF除了移除雜質，還有aggregate，端看你實驗的要求
→ trumpet:3. 跟表現系統有關，也和純化wash的方法有關
→ trumpet:表現系統可能會有非專一性的吸附產生雜質
→ trumpet:適當的wash可以減少非專一性的吸附，達到降低雜質的結果
→ ohyeh1021:可以說純度跟產量是成反比？