Re: [求救] pcr跑膠呈色不均

[likemsn (是喜歡msn不是喜歡男生)]

※ 引述《likemsn (是喜歡msn不是喜歡男生)》之銘言：
: 這個...新手小弟上來發問
: 既marker跑不一樣高之後，又遇到跑膠的顏色不一樣
: 不曉得各位能不能理解我的意思
: 就用EtBr染完色後，膠體呈現上面顏色較亮的情形
: 就是在洞口那排較亮
: 可是我明明染色時是平行放入應該不會有染色不均的問題
: 而且有時候會出現有時則否，完全是看天吃飯= =
: 最近則是比較常出現
: 到底是哪個環節出現問題
: 不曉得有沒有好心的大大可以點破癥結點，感恩~

放照片起來麻煩各位大大幫我解惑

http://www.wretch.cc/album/show.php?i=t7396&b=15&f=1598928636&p=0

再次感謝~^^




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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
推 sunnyforever:先確定膠有完全溶解(要搖一搖)並凝固完全(可冰冰箱)
→ sunnyforever:EtBr外染液、TAE有定期更新
→ sunnyforever:選對適當marker，才不會跑太久使EtBr集中上方
請問一下sunny大你的TAE是多久更換一次阿?如果是在每天都跑的情況下
→ nike77114:請把你的狀況詳細敘述一下吧，之前你那篇說用7%agarose
→ nike77114:這次的情況是甚麼呢?y
n大，這次的情況跟上次一樣，只是放照片起來供大家解惑，因為我也不太確認之前我的
推估是否正確
推 mesenchymal:7%似乎不是原PO推的
※ 編輯: likemsn         來自: 210.60.122.160       (11/06 11:28)
推 sunnyforever:一天跑三次,每次30分鐘,約3~4天換一次TAE
→ sunnyforever:你可以用血清瓶回收reuse TAE,即可以增加使用次數
我不用的TAE都倒掉說，覺得好浪費。那sunny大你所謂的增加使用次數是指?還可以再跑?
→ sunnyforever:可是主要還是要buffer乾淨為主~
→ sunnyforever:如果不裝瓶而放室溫,其水分也會不斷蒸發使濃度改變
推 sunnyforever:如果是實驗data,建議還是以新的buffer使用為主
→ sunnyforever:剛跑過的buffer建議不要馬上再跑,太熱會不好看~
推 jsi:band都很直看起來很ok，只是你要觀察的band size小，下次可以
→ jsi:不要跑那麼下面，就不會糊糊的。此外，膠上方染得比較亮並不影
→ jsi:響結果觀察，下次你跑短時間染色看看，應該亮的區域會比現在大
→ jsi:(如果內染的話)。千萬別因此一直卡在這裡~
回j大，因為我們家老闆是求好心切型的，所以還是希望跑出來能漂亮。如果是短時間
染色怕出來的band就沒那麼亮
※ 編輯: likemsn         來自: 210.60.122.160       (11/06 17:00)
推 sunnyforever:我的意思是 跑完一次後 若當天沒有要再跑
→ sunnyforever:即可將TAE倒入瓶內鎖緊 避免水分蒸發
→ sunnyforever:如此可減少鹽類濃度改變的程度
→ sunnyforever:如果真的想要好看 那建議還是用內染的方式
→ sunnyforever:殘留的EtBr用酒精或照光都可以去除 並沒有那麼可怕
→ sunnyforever:如果真的要跑很久 TBE也可以列入考慮了
感謝sunny大不厭其煩說明，小弟會依照您指示的方法試試~^^
※ 編輯: likemsn         來自: 1.160.236.179        (11/06 21:50)
→ nike77114:你可以染久一點。然後再用水退染，另外膠不要鑄太厚也是
→ nike77114:可以試試看
→ enjorus:看起來是褪染有問題. 所以背景值過高