[求救] RAW264細胞發炎反應相關實驗

[sanichi ( 扶桑花小班班長)]

我們研究室常需要用RAW細胞做發炎反應的相關實驗~
基本上都是用LPS(5ug/ml)或3T3L1脂肪細胞的conditioned medium來誘發發炎反應,
但最近兩年RAW細胞的狀況一直不太穩定~
control組(PBS,serum free media)常已經處於發炎狀態，
NO或TNF-a的分泌量都幾乎要跟LPS組的一樣多~
買過新的RAW細胞,一開始情況有改善...
但passage2~3次之後,control組又開始出現發炎反應...
而且增殖的非常快,大概1~2天就要passage~
這兩年發炎相關的實驗都無法正常進行...

medium是用買的所以不太可能是配置上的問題
我有想過會不會是FBS的問題...
因為中間有換過廠商
但有時候實驗又可以正常進行...
請問有人有類似的經驗嗎???
RAW細胞的培養有什麼和其他細胞不一樣特別需要注意的地方嗎???

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◆ From: 210.146.150.104
→ genep:以前養macrophage cell line都要買low-endotoxin FBS,
→ genep:Hyclone跟Gibco都有 可以問問其他實驗室或是sales適合的
→ genep:不過不能確定是不是跟你的問題有關
→ jasonstudio:個人覺得FBS差很多耶 還有你用的PBS也有差
推 jasonstudio:還有就是你有爆盤 FBS真的要挑LOW-ENDOTOXIN的
→ jasonstudio:如果你是用沖OR刮的手法讓碎片變多個人覺得也會有差
→ jasonstudio:FBS可以的話看用的量把同個批號買下來吧
→ jasonstudio:另外控制兩天OR三天passage吧 一天我也覺得很容易發炎
推 c1314205:細胞不能太滿，一滿就容易受到刺激，推樓上，起碼要2天才
→ c1314205:能pa一次，macrophage很容易受到刺激活化，pa的過程也很
→ c1314205:很重要!
推 jethuang:macrophage cell line在做發炎反應時,pa細胞時,建議用
→ jethuang:建議用刮的,用Trpsin-EDTA打的話,易誘導發炎反應!!