[討論] BCA定量計算問題

[kobeiloveyou (我超強暴)]

大家好

在做BCA時

Standard curve的濃度為2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625 mg/mL

未知濃度的樣品稀釋 2X, 4X, 8X, 16X, 32X, 64X, 128X 這七種稀釋倍率

加reagent後 在37度 反應10分鐘

而這7種稀釋倍率的吸光值 皆能落在standard curve裡的話

將每個稀釋倍率的吸光值 帶入standard curve 在乘回稀釋倍率

理論上 每個濃度要差不多才是

可是卻都不相同

所以想請問

到底要選哪一個稀釋倍率為可信的呢?

還有 請問混和 reagent A和B時 需不需要避光呢?

謝謝大家!!


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◆ From: 140.112.74.19
推 jasonstudio:你如果落在濃度比較低的範圍 就把標準線高濃度的拿掉
→ jasonstudio:這是跟拉趨勢線的公式有關 數值越大影響越大
→ raiyu:不須避光;另外 我做是37度30min,10分鐘會不會太短?
→ kobeiloveyou:所以是要能落在較低濃度的稀釋倍率 比較可信囉?
→ kobeiloveyou:請問為啥每種稀釋倍率回乘後 濃度都不一樣?
→ kobeiloveyou:10分鐘,我讓最高濃度的Standard吸光到0.9多,就不反應
→ jsi:反應要多久說明書裡就有寫，照著做吧~
推 jasonstudio:這樣說好了 你的吸光值最好落在標準曲線的中間
→ jasonstudio:這樣會比較準一點 另外你可以用你的樣品吸光值做一條
→ jasonstudio:標準線 看是不是稀釋有問題