[求救] Luciferase assay system

[rickkao11 (rickkao11)]

想請問一下大家關於luciferase internal control的問題

目前是用promega的dual系統，pGL3 cotransfection with pRL-TK

可是一直怪怪的，

老師就想去查查看如果改用GFP當control是否可行
之前版上似乎有人這樣做過，不過並沒有回應


想請問一下如果cotransfection GFP和 pGL3的話
在測光的時候是否有影響
(雖然就原理上一個是冷光一個是螢光應該不會有影響
可是還是想問問看有沒有人做過)


另外想請問一下最近有業務在推Pierce luciferase dual system
那時問的價錢有差，而且似乎不用像promega加兩種試劑
老師還蠻有興趣的
想請問有沒有人用過，用起來怎麼樣?

謝謝!

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◆ From: 140.112.121.97
→ lovenainai:不要鬧了..
→ rickkao11:不好意思可以請問一下是為什麼嗎?
→ blence:你們有機器可以讀各種波長的冷光,甚至還能激發螢光嗎？
→ rickkao11:老師是打算要用GFP的抗體壓western，是怕說測冷光時會
→ rickkao11:不會影響
→ rickkao11:另外是有考慮trysin下來的細胞分兩堆，一堆做luciferase
→ rickkao11:一堆拿去測Flow，不過主要的問題是在於說測冷光時，gGPP
→ rickkao11:會不會影響到Luciferase的值
→ blence:既然GFP要用WB壓,不如像以前送pSV-b-gal好了,reader就可測
推 HEK293:gfp不可能影響，發光機制根本不同
→ HEK293:dual reporter很貴但是定量上比較嚴謹。
→ HEK293:用gfp當control是因為不想買coeleterazine?
推 joseph103331:不會影響啦....
→ Realthugz:我以前用Beta gal 同時也有送含GFP的plasmid
→ Realthugz:測的是luciferase 也是Promega 沒問題阿
→ a90648:實驗室有人做過，沒問題
→ nzj:一個要激發光源,一個部用;一個不需reagents,一個要
→ nzj:另外,跑western時,luciferase應該以denature (SDS-PAGE)