[求救] western blot transfer

[piano0525 (尋找大肚腩)]

請問板上大大是否有人跑過565左右分子量的蛋白嗎?

transfer的條件是?

我之前用過60mA O/N

但是回去染膠發現大分子的幾乎都沒過去(已把250的marker跑到5%膠的底部了)

希望大家幫幫忙

謝謝

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◆ From: 203.64.247.31
推 leoblack:wet transfer?!我一般7X kda的都100mA o/n了~你只跑60?!
→ allisa:你要transfer大分子蛋白的話 transfer buffer中要含0.1%SDS
→ allisa:然後如果是用pvdf membrane就不要加methanol(活化membrane
→ allisa:還是要用) 不過buffer就不加methanol
→ allisa:然後我都是用400mA 60min 但tank要埋在冰裡降溫
→ blence:若是一般transfer條件,400mA 60min對565kda的時間絕對太少
→ ivylikecat:我們家transfer大分子會換buffer~
→ ivylikecat:我們是溼式..跑100v 3~4小時 4度C
推 windyflyer:可以在此偷偷求transfer buffer(含methanol)配方嗎?
→ windyflyer:我們家自從某一次搞丟以前的transfer buff配方用隔壁
→ windyflyer:實驗室的之後 都有tran不乾淨的狀況 從35kDa就會殘留