[求救] 如何treat 懸浮型細胞 ??

[konnankonnan (天使海豚)]

我的實驗想觀察一個疑似 COX-2 inhibitor (藥劑 A) 是否會抑制淋巴細胞活化

我看了paper, 別人的作法是將 (藥劑 A) 先 treat 貼附型細胞 (A549), 30 min
然後再用 PMA 刺激 A549...然後再分析 COX-2 的表現

由於這個藥劑目前相關資訊有限, 而且也找不到有人用在淋巴細胞上,
而淋巴球細胞又是懸浮型細胞, 所以只能自己想像一下作法

我的想法是:
  1. 將淋巴細胞培養在plate上, 30 min, 等待自然沈降,
  2. 加入(藥劑 A), 時間為 30 min
  3. 將細胞取出, 以離心方式得到 pellet
  4. 用新的培養液懸浮細胞, 然後在養回 plate 上, 30 min, 等待沈降
  5. 加入 PMA 做刺激, 時間到之後分析相關蛋白的表現

(步驟 3 的目的為 wash 用途, 只是 paper 沒有註明需不需要, 這是自己想的)

由於一般貼附型細胞只要將培養液吸出, 換上新的即可,
但是我養的是懸浮席細胞, 很害怕一吸之後, 細胞會被吸走

不知道版上是否有前輩能夠提供經驗或是一些文獻給小弟做參考...謝謝

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◆ From: 122.146.177.66
→ blence:請問加藥前必須讓細胞"等待自然沈降"的目的是什麼？
→ wang7514:如果你的細胞不會因為A藥劑處理而死亡
→ wang7514:建議你可以同時試試跳過步驟3
→ wang7514:原PO自然沈降細胞應該是希望細胞都貼附在底部再作處理
→ wang7514:不過如果是THP1這種淋巴細胞 可能震蕩一下就飄了@@