[討論]Western blot 抗體跑FACS?

[keeny (keeny￾ ￾NN )]

請教各位高手

有沒有人用WB的抗體跑過flow?

我最近遇到一個難解的結果

siRNA KO目標蛋白tetraspanin CD82用WB可以看到>90% KO

FACS卻顯示細胞表面CD82沒變化而且flurorescent intensity很弱

感覺有點難解釋(其實是有很多可能啦)

但是要是因為是FACS抗體不好的話我的問題會變簡單許多

所以我想要用WB抗體去跑FACS

大家有沒有甚麼看法?
謝謝指教

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oh my god!! 我又在枕頭上流口水啦！！

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 150.231.246.1
推 joseph103331:siRNA會Knock out嗎? 應該是Knock down吧~
→ joseph103331:fluoroscent intensity變弱不就表示有KD了嗎?
→ blence:你有先測試這支抗體可以染完可以用FACS看嗎？
→ blence:實驗應該先比較有無一抗下,2抗染色後有沒差別的測試吧
→ blence:另外沒有所謂WB抗體,只有抗體能適用如WB,ICC,FACS哪些實驗
→ williamyang:跑FACS建議買專用的,如BD,eBiosciencec或是biolegend
推 qiet:連control組螢光都很弱? 抗體壞掉?
→ keeny:thanks for comments.
推 hsuwenli:推"跑FACS建議買專用的"!