[求救] mutation的問題

[sa74283 (sa74283)]

最近用quikchange的kit在做mutation

PCR之後有跑gel，可以看到明顯的band
DpnI digest之後做transform
卻沒有colony長出來 QQ

請問可能是哪步驟出問題了嗎??
請大家給我意見吧!!
謝謝~~

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.128.67.249
→ williamyang:recovey time?
→ williamyang:recovery, sorry.
→ sa74283:1hr  or  1hr以上 都有
→ blence:TM是建議DpnI切完再跑膠,以免你看的band是uncut
→ blence:如果band是真的,colony也沒長,直接從transform問題找起
→ sa74283:是指看band是不是linear form的嗎?
推 windyflyer:我也用過這組kit 提供我的方法給你參考~
→ windyflyer:我前面步驟都照protocol 但是P完等確定冷卻後(通常都偷
→ windyflyer:懶冰4度O/N)然後再加入DpnI反應 接著取10ul去transform
→ windyflyer:我用他提供的competent cell很難長
→ windyflyer:難長colony 這是我的方法啦@@"有點偏方XDD
→ windyflyer:用他的competent cell很難長 所以我用我們家自己做的