[求救]beta actin壓出來控制組跟誘導組差很多？

[Daphnia (Daphnia)]

用幽門螺旋桿菌誘導MKN45 24h
用細胞括勺收細胞(含菌)離心去除上清液用lysis buffer(promega biotech)破細胞
用BRAFORD定量蛋白
用8%的膠 轉漬的膜是用ＰＶＤＦ膜
用的抗體是聖誕老人的
https://www.dropbox.com/s/txah7f03rjap317/Bactin.pdf
最右邊的是沒有家菌的左邊的四個是幽門螺旋桿菌處理的

這到底是怎麼會是啦！！！拜託各位幫我想想是怎麼回事
我有想是不是我的菌讓我的細胞死掉很多或著是加了菌,菌的蛋白影響定量
這總實驗誘導的方式滿多ＰＡＰＥＲ都有用類似的方式但他們壓出來很像都沒有
類似的問題！！！

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◆ From: 140.120.104.158
※ 編輯: Daphnia         來自: 140.120.104.158      (12/10 16:06)
※ TW185930:轉錄至看板 Biology                                     12/10 16:58
→ williamyang:換alpha tubulin,GAPDH,或是histone之類的試試看?
推 chench0710:私以為是HP菌的的蛋白質也被定量進去了
→ chench0710:也因此human actin的比例也被壓低惹
推 chench0710:如果要證實的話可以去壓壓看HP菌的protein XD
→ Daphnia:控制組在誘導完破細胞時會加等量的hp一起收但壓出來一樣
→ Daphnia:想知道我用的lysis buffer會不會也收到菌的蛋白！？
推 chench0710:誘導的這段時間HP可能也會長,不知道有沒有考慮進去?
→ Daphnia:後來加進去的hp在同一個六孔盤培養所以會長應該差不多
推 chench0710:若是細胞有死很多的話可以試試看在離心完之後
→ chench0710:用冰的PBS去把它打散在離心一次之後再破細胞...
→ chench0710:因為medium裡面本身也有protein(from FBS)如果細胞真的
→ chench0710:死很多的時候就會被這個影響~"~但我覺得應該不是就對了
推 chench0710:還是說定量的時候出問題?控制組濃度不小心爆表了= =?
→ Daphnia:感謝！以上方法我試試看