Re: [討論] SDS-PAGE dye轉黃&跑不動的問題

[carnation (卡內省)]

藉這篇許久以前的文章，我最近也遇到相同的問題，

不知道原po解決了嗎?

或是大雞還有甚麼其他的辦法?



我的野是dye約跑到距離底部還有1~2cm的地方就開始變黃，

然後band扭曲，再也跑不動，

染色或壓片之後發現 分子量低的都分不開，

所有buffer都重新配置且調過pH

(只有running buffer沒調pH) 還是一樣，


過程中stacking : 60V

      seperating: 95V

全程在冰箱跑


我知道bromophenol blue是在pH=3的時候會變黃色，

可我實在想不透buffer的重配了還會有甚麼問題。

我的sample是植物的蛋白質 溶在Tris-HCl裡的，

用之前會加2X sample buffer with 2-ME 加熱95度C五分鐘，

不知道用Tris-HCl溶對整個的pH會有影響嗎?


令外我有看到有國外的網站說如果變黃色的話可以試著在sample 中一點點的 NaOH,

有人試過這方法嗎? 一點點不知道是加多少...


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◆ From: 220.135.248.46
※ 編輯: carnation       來自: 220.135.248.46       (12/11 20:28)
→ blence:gel含的Tris-HCl的配法?過酸或過鹼不斷中和造成的salt過多?
→ blence:以前隔壁實驗室跑膠一半之後變黃及需要cooler就是這個問題
推 genius012:God  我也有這個問題  不過有時好有時糟  蠻困擾的
→ carnation:我的seperating gel是2M TrisHCl pH8.8 稀釋，我再配這
→ carnation:buffer的時候很難溶，好不容易靠加熱溶解，調pH的時候
→ carnation:也調很久才到8.8
→ carnation:另外stacking gel是1M TrisHCl pH6.8稀釋，溶解度還好
→ carnation:但調pH也調很久...
→ blence:我猜的是配Tris 8.8或6.8stock的過程造成這些問題,而非稀釋
推 hangzer:2M和1M會不會太濃? 我們lab是1M和0.5M的 不過6.8本來就要
→ hangzer:調很一陣子
推 joseph103331:我們都是1.5M....話說變黃色我跑久了還是跑掉
→ joseph103331:另外我家跑168V.....
→ wadeedaw:可以試試看Tris base 調pH值比較方便
→ wadeedaw:不過我有點忘了配膠用的是哪一種tris 明天到實驗室查一下
→ carnation:謝謝waddedaw ~
→ Anvec:請用 tris-base 配下層膠唷 沒意外的話配好的 pH 應該是對的
→ Anvec:你把緩衝用的溶液從 pH 6.8 滴定到 pH 8.8 它就沒有緩衝效果
→ Anvec:那跑到最後 pH 值一定會越來越酸