[方法] Migration assay不均勻

[spirithorse (咩)]

最近做Migration時好時壞

做三重覆會有其中一個幾乎空白,另外兩個正常
(或是更慘..三個都空白)
本來以為會不會是Fibronectin有問題(配錯??)

但是做了9個well,有4-5個是全空白
或是well中間一圈完全沒細胞    如圖: http://ppt.cc/BCIb

請問是否有人遇到過類似的問題
或幫我想想大概有哪裡需要注意的眉角

謝謝!!

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.35.0.61
※ 編輯: spirithorse     來自: 114.35.0.61          (01/01 18:41)
→ gryou:有氣泡？
推 ling0714:我是中間一大坨細胞=   =
→ isntangel:這是用transwell做的嗎?我是不知道fibronectin要幹嘛
→ isntangel:我做的還蠻漂亮的@@~還是做不出~改wound healing看看囉
→ isntangel:簡單又省錢^^
→ spirithorse:加入Fibronectin後有敲打plate,確定沒有氣泡
→ spirithorse:to instangel..一定要做出來啊!!!
→ isntangel:是用來coating嘛？migration不用摳吧?
→ hhhhh100000:也有賣coating好fibronectin的transwell
推 abcam:可以換換別家的transwell呀...
→ abcam:保吉生化學、Coring、BD 都有賣的樣子..我都用過..都不錯!
→ keeny:這種情況我遇過,跟細胞大小和爬的速度有關,可以試著放久點
→ keeny:不過我建議不要用這種方法實在太主觀,可以用corningHTS 96W
→ keeny:最後再去用Calcein AM染,然後讀螢光,客觀又不會被攻擊.
→ keeny:我之前被reviewers電的很慘.
→ isketo:insert內的體積加到200 ul,可以減少load 後細胞往insert周
→ isketo:邊聚集的現象。