[求救] active caspase-6 偵測

[nhxcyge (人生就像個不可逆反應)]

各位版友好，

想請問一下有沒有人用過 cell signaling他們家的cleaved caspase-6 (#9761)

http://tinyurl.com/b76yf56，先前實驗發現我的蛋白質(可能是caspase-6的受質)，

有被切的現象，而大小也正好事caspase-6的切位。因此想直接壓cleaved caspase-6

的訊號。但在十幾kD的位子沒看到我預期的訊號，且backgroud頗髒。

我的實驗步驟如下：

1、實驗的sample (原濃度為1 ug/ul)利用蛋白質沉澱方式濃縮三倍(理論濃度為3 ug/ul)

2、每個lane loading 60 ug的蛋白質。

3、跑12%的gel。

4、Blocking with 3% BSA 1小時。

5、Cleaved caspase-6 (1:1000) O/N.

6、Anti-rabbit (1:2000) 1小時。

請問有什麼地方可以改進的嗎…？ 謝謝！

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.114.237.129
推 roy047:可先照data sheet的步驟 用牛奶blocking和下抗體減少雜訊
→ roy047:因為有時牛奶blocking效果比BSA好
推 qiet:找個postive control一起試試吧 說不定caspase-6沒被切
推 alaric:二抗會不太濃了? 照片如果有, 可以po看看.
→ kg9101266:有目標蛋白但背景髒可以先試5%milk blocking 如果目標沒
→ kg9101266:有消失但背景還是不乾淨 再試5%牛奶+1%BSA(這招很強大)
→ blence:試這一類帶有某些activity意涵的Ab沒有比較postive實在不推