[求救] apoptosis 測法

[windwin (小均均)]

各位版友好

目前我在測神經細胞的apoptosis

我用了

IMR32, N2A, dPC12

三種細胞去測

方法為annexin V /PI   去測


都只測到PI

annexin V 則毫無反應


請別間實驗室去測

確定annexin V是沒問題的

我是和有經驗但以前用不同細胞測的學姊一起測

所以操作上應該沒有問題

請問為什麼會有這樣的情況呢?

我現在想改用

H 33342 /PI 去測 (flow)

或單純用 H 33342 去測 (microscope)

想問後者要如何進行數量分析?

是一個一個數然後看有哪些產生apoptosis

還是直接算螢光強度就好了呢?

(我看paper都只說用microscope去測量)

謝謝大家






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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.112.79.11
→ roy047:時間點有往前試過嗎? late apoptosis也會變成annexin V-
→ roy047:第二點之前經驗是算apoptosis百分比 較好 強度可能不太準
→ windwin:因為ANNEXIN v完全沒有，連一點反應也沒有...
→ roy047:同時做個positive control看看? 也可能是染劑問題
→ roy047:有確定Annexin V後面接的flurophore可被偵測到嗎?
→ windwin:有請別實驗室的同學做過不同實驗，annexin V 沒問題
→ roy047:如果都不是的話 可能就要換方法看看了
→ roy047:還有想到一個 Annexin V染完後要馬上測 不然會消失
→ roy047:不知是否這原因
→ windwin:使用Cycloheximide做為positive control
→ windwin:全程避光，因為有加pi所以無法馬上測
→ windwin:非常感謝您喔~
推 roy047:ORZ 那只好建議先換方法看是否真是apoptosis了 祝順利
→ roy047:抱歉這三種細胞都沒做過~無法幫上忙@@
推 qiet:是指positive ctrl也都只有PI+?
→ windwin:是的!!!
推 qiet:確定這個postive ctrl適用這些細胞嗎 濃度是否正確
→ qiet:該不會都necrosis了
→ skyofsilver:感覺是染劑問題或沒染上 印象中late apoptosis比較會
→ skyofsilver:是annexin V+ PI+