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染色階段順序為下 Methanol 10 min (fix cell) ↓ 浸水 5 min (中止methanol反應) ↓ 用棉花棒除去transwell上層gel ↓ LiuA 1 min ↓ LiuB 1.5 min ↓ 大量清水沖洗 目前碰到問題就是.... 我浸完methanol後~細胞掉超級多下去 導致染完色根本看不出差別 我做的是A549 分別加藥和不加藥來看invasion能力的變化 那Control浸完methanol後掉的細胞超多~我認為代表是爬過去的較多 可是methanol根本無法固定住細胞~這樣染色根本毫無意義 請各位大師救救小弟~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.51.37
tsubasawolfy:methanol fix在RT情況下反應強烈容易掉細胞 01/27 10:34
tsubasawolfy:要用methanol fix的話先降溫到-20度C再加 反應也在-2 01/27 10:35
tsubasawolfy:0 不然你就改用paraformaldehyde在RT下反應 01/27 10:36
tsubasawolfy:另外methanol會把membrane lipid完全去除 如果你之後 01/27 10:37
tsubasawolfy:要看細胞膜上的蛋白就不要用 01/27 10:37
raiyu:我前陣子也卡關在染色後來改成10%formadehyde直接fix 15min 01/27 14:57
raiyu: 更正3.7% 01/27 15:04