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請問各位 electroporation如何避免電爆呢? 最近每電必爆 前陣子成功率還蠻高的,快氣死人了 實驗的條件為1900 V 約40 ul competent cell 加10 ul ligated plasmid 外觀看起來沒有氣泡,水滴也有擦乾 plasmid量太多會有影響嗎? 或是plasmid體積太大影響電阻? cuvette也有放冰上預冷 但預冷是要把整根金屬部分都埋進去呢? 或是大概菌液會接觸到的部分就足夠? 還有其他可能失敗的原因嗎? 實在是電到很挫折啊... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.99.150
shiningspark:另外請教,爆過的cuvette還可以reuse嗎?? 01/31 05:32
skybreeze:之前做是整個金屬部分都放下去預冷 01/31 08:34
skybreeze:是否有其他的cuvette可以試試看!? 01/31 08:34
cloneting:cuvette要用超音波洗過,DNA太濃 鹽濃度過高必爆 01/31 11:59
shiningspark:好像是喔,同一個vector作self-ligation,不加insert 01/31 15:03
shiningspark:改補ddH20,濃度約減半,就成功了(雖然還是失敗一次) 01/31 15:05
shiningspark:測了260/230=1.5,請問這sample鹽濃度是可接受的嗎? 01/31 16:12
licat:爆過還是可以再用 我以前都用到外表龜裂 或是只加水也會爆時 02/02 19:09
licat:才會丟掉 另外你ligation product加越多 整體鹽濃度越高 02/02 19:11
licat:就越容易爆管 如果ligation有成功 其實你加2-3 ul就可以了 02/02 19:11
licat:但你ligation的條件我不知道 所以你得自己抓適合的體積 02/02 19:15
licat:加到10 ul實在太多就是... 02/02 19:15
shiningspark:感謝大家的回答喔,不過還有一點不太明白,DNA太濃為 02/03 05:23
shiningspark:何也會造成arcing呢? 因為DNA帶負電嗎? 02/03 05:26
licat:我不清楚DNA的帶電是否會影響 但當你把DNA濃度放大時 02/03 10:49
licat:溶液中) 畢竟純化的DNA溶液中不會只有"DNA" 02/03 10:51