[求救] 以LPS刺激RAW264.7的劑量

[greenpeace29 (修)]

請問大家在以LPS刺激RAW264.7時 LPS都下多少呢?
我要測刺激後上清中cytokine的分泌量

之前我用實驗室舊的raw 養在10%FBS+DMEM中
下LPS 160ng/ml, 刺激24hr
測到TNF alpha 有3000多pg/ml
IL-6只有30多pg/ml

後來向食工所買了新的raw, 同樣以160ng/ml刺激24hr
測到TNF alpha有5000多pg/ml
但IL-6只有不到10pg 囧
也測不到IL-1b, IL-12
是這樣的劑量還不足以刺激他嗎?!
查了文獻發現不少人LPS下到micro等級,當然也有只用100ng的
想問問看大家意見.
謝謝 (_ _)


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◆ From: 175.180.181.115
→ utadalove:細胞數? 96-well??
→ greenpeace29:種在96well 每個2x10^4 100ul
推 robin:LPS濃度夠 試試細胞數2x10^5吧~~
→ greenpeace29:最後濃度是2x10^5沒錯 上面打的是每well有的細胞數
→ greenpeace29:意思是LPS下到160ng/ml應該就能刺激嗎?謝謝
推 robin:拍謝 沒寫清楚 我是說每well種2x10^5的細胞 ~~
推 jasonstudio:LPS是SIGMA的吧? 不同菌株有差 原廠MSDS都有建議劑量
→ jasonstudio:你如果用055那個 濃度可以很低 買它細胞專用的那個
→ jasonstudio:原廠建議是1ug 建議你先看看手上的lps的來源
→ jasonstudio:細胞數這樣很OK 拉到10^5 如果有先放24H的話會太滿
推 c1314205:working 1ug/ml
→ greenpeace29:瞭解,謝謝樓上幾位!!:)