[求救]關於HUVEC的一些問題

[bin28 (binbin)]

最近在養HUVEC, 這株細胞真的很難伺候, 養到快崩潰了

遇到的一些問題如下

1. 剛解凍的細胞貼盤數超少

2. 長出來的細胞型態很醜(核很大,而且細胞週邊破碎)

3. Medium => 剛配時有用HCl下去調pH值到7.2

             但是大約過一個禮拜pH值上升到7.9

             不知道medium的酸鹼值該如何去維持

             (另外想請問用HCl調pH值調過頭再用NaOH調會不會有什麼影響)


以上幾點

希望板上有做HUVEC的大大可以給小妹指點迷津Q_______Q



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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.38.0.54
推 caesar0926:dish有coating東西嗎? 聽學長姐養要coating gelatin
→ bin28:有coat 1% gelatin
推 captdavince:medium請用CO2調...詳細請看食工所的資料..網路上都有
推 jsi:從臍帶分離出來養三、四代後型態常會變。解凍後貼得少，可考慮
→ jsi:解凍多管至同一flask養，當天先不用離心洗去DMSO，直接以培養
→ jsi:液稀釋DMSO就放進去養，隔天細胞貼好，再換培養液即可。通常兩
→ jsi:天換一次培養液至你需要的細胞量，很燒錢。Nature Protocols
→ jsi:2,481-485(2007)參考看看。HEPES,sodium bicarbonate+CO2都是
→ jsi:用來穩定培養液pH值的方法。有的實驗室喜歡直接用primary cell
→ jsi:做實驗。
→ a001ou:Medium我們有加HEPES 穩定pH值很威
→ untilnow:你用什麼樣的medium?
→ bin28:medium是用M199，加20%的FBS
※ 編輯: bin28           來自: 114.38.0.54          (02/25 00:11)