[求救] 以細菌設計Primer進行實驗之問題

[sjacky (陳小文)]

大家好

請教一下大家，目前的實驗是針對所有細菌的16S設計Primer，

有參考paper & 自行設計的進行PCR實驗

後來發現進行PCR後，跑電泳，在單一菌株的位置是沒有問題的

但是在只有加ddH2O的那一管，在相同的位置也出現Band

ddH2O已經有購買市面上無菌的純水以及所有藥品均已換新進行過實驗

不知道是否所有細菌的Primer不適合以ddH20當作Control？

或 我有甚麼實驗有錯誤嗎？

不懂為什麼ddH2O都會出現與設計片段大小相同的Band

謝謝

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◆ From: 114.38.230.48
→ BGG:Enzyme有些是從菌來的，有可能會污染
推 MORAKOT:以前別的實驗室有發生過類似的事情，他們是pipette汙染。
→ MORAKOT:以及開蓋tube習慣不佳汙染。
→ walter1234:可以用filter的tip試試看
→ walter1234:換不同家PCR kit試試看
→ walter1234:通常我做這實驗前都會用紫外光照，因為滅菌釜無法消DNA
→ chuenwon:就是汙染......  整個流程都有問題
→ sjacky:以相同的水與試劑做病毒,黴菌,原蟲等其他實驗PCR皆無問題
→ sjacky:且都是同時進行的,結果都無問題,只有細菌出了問題,請問除了
→ sjacky:污染外,還有其他的可能性嗎?或者是酵素原來自細菌的關係呢
推 walter1234:所以才說換家PCR kit試試看，之前我換另一家就好了
→ walter1234:有時候是廠商的酵素問題，(這問題我也搞了一兩個月)