[求救] MTT assay

[sss79818 (豪洨哥)]

不好意思，上來請教一下

目前我做的實驗是以光動力治療產生自由基來殺死癌細胞(hela cell)

seed在96 well裡，每格5000個，養兩天後加藥

實驗組別有

1.medium裡加入亞甲基藍，放回培養箱2hr後拿出來打雷射4分鐘(光動力治療組)

2.一樣是加入亞甲基藍，但是不打雷射(測單純藥物暗毒性組)

3.什麼都不做(control group)

目前我是在下藥後的隔一天才拿出來做MTT assay

但做了好幾次結果都跳動很大不如預期


我在想隔一天才做MTT會不會隔太久，

可能光動力治療後死掉的細胞也沒那麼多，隔天就又長滿了

但又怕太早做的話，細胞還沒死透，這樣測出來會不準


據我所知，光動力治療會induce cell apoptosis

而MTT是靠測量粒線體活性來反映細胞活性

請問若細胞已經開始aptosis的話，粒線體會馬上失去活性嗎?

還是要等到later stage的時候才會呢?



查了好幾篇相關paper關於這方面的細節都沒有詳述

學長姐們做的實驗方向也跟我不太一樣，愛莫能助

所以只好上來求救了

謝謝幫忙~"~

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.182.185
推 tsubasawolfy:沒先做雷射強度梯度測試 還有positive control?
→ Ianthegood:樓上中肯 有相關的reference嗎?
→ untilnow:ap"op"tosis?
→ blence:你可以查一下一般radiation之後，大概多久才看到cell death
→ blence:再去回答隔一天就加MTT會不會太短,再者5000cell放兩天才處
→ blence:理,應該可以在處理當下看到細胞在96well就差不多要擠滿了
→ blence:這種滿度下control組還要多放一天才做MTT,顯然不太好
推 CD133:blence正解，hela長得快的跟細菌一樣，今天seeding明天就要
→ CD133:做了，另外，96 well最外圍的well不要用，medium體積會變動
推 apple23418:有先算hela的double in time嗎？  測MTS前不是都要先
→ apple23418:測細胞的生長曲線嗎？看他多久二分裂,加藥後光動力治
→ apple23418:療可能三小時六小時九小時測一次這樣！
→ apple23418:一點小小的意見不知這對不對！請見諒
→ sss79818:感謝各位的回答 我先把加藥時間提前看看 seeding後放兩天
→ sss79818:真的太長了
※ 編輯: sss79818        來自: 112.104.153.17       (03/15 22:51)