[求救] Q-PCR 新手求助 (夾不出東西)

[Tendin1015 (Tendin)]

各位前輩大家好，

小弟第一次接觸 Q-PCR 的實驗，但遇到了一些問題始終無法突破。

抽 RNA 的部分我是用一般的 Trizol，260/280 也約在 1.9~2.0

跑電泳看 18S/28S 的情況也還 ok。


轉 cDNA，然後跑 Q-PCR。

第一次試跑我選用 Beta-actin。

我先配 mixture (H2O、2x Taqman Premix、Primer F+R、Probe)，

先加到毛細管後再加入 cDNA。

Q-PCR 的 program 也是按實驗室方法去設定，可是我還是沒有跑出東西。


後來向前輩借用他們確定能跑出來的 cDNA 來試，結果還是沒有東西。

我覺得應該就是 Q-PCR 這部分出了什麼問題，

也有請實驗室前輩在旁指導，也沒有什麼說操作上有什麼問題。


想請教各位前輩，是不是有什麼細節我忽略了，

不然我照著 Protocol 做還真的是跑不出來，困擾已久。

(Reagent、Primer、Probe等也都是跟前輩們用的一樣)

麻煩各位前輩看看有什麼經驗或細節，給我一些建議。

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 120.126.88.222
→ mesenchymal:看你描述不是機器就是reagent出問題, Primer?
→ WinnieDad:有用qPCR跑完的samples再去跑agarose gel看看是否有PCR
→ WinnieDad:產物確認一下嗎？
→ Tendin1015:謝謝大家，確實是 reagent 的問題。跑 gel 有產物。