作者chun770526 (chun°)
看板Biotech
標題[求救] a-SMA螢光染不出來
時間Wed Mar 27 11:18:26 2013
最近在染 a-SMA(sigma) 的螢光
我是用24well plate種細胞，三天跟七天後收
1. 用4% paraformaldehyde 固定10min
2. PBS wash 5min*3
3. 抽乾PBS後加入 P/T (PBS+0.1% TritonX-100) 30min
4. PBS wash 5min*3
5. 用P/S (PBS+5% heat inactivated serum) blocking
6. 加入primary antibody (1:50) 4C O/N，
7. wash 10min*3
8. 加入2抗 (1:200) 2hr，避光
9. wash 5min*3
10. 染DAPI 1min抽掉
11. 200X拍照
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我看網路上的a-SMA以及抗體附上的datasheet，都有很明顯很漂亮的線狀
可是我染出來都沒有，不知道是不是用24 well plate的關係?
會跟玻片的差很多嗎?
附上我的螢光圖
http://tinyurl.com/dxr5cwu (3days)
http://tinyurl.com/c7hpkx6 (7days)
不好意思麻煩各位了謝謝。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.27
→ abcam:改別家抗體試試呀.. 03/27 17:43
→ abcam:背景有點髒ㄟ.... 03/27 17:44
→ abcam:用cover glass應該會好很多~ 03/27 17:44
推 jabari:改用abcam的抗體... (這算工商服務嗎QwQ? XD) 03/27 22:17
推 tchan:抗體多試幾個條件吧，然後若非特殊需求，細胞滿度可以降 03/28 08:12
→ vandia:這串推文好有趣 XD 03/29 17:05
推 abcam:不要用abcam 好了...Dako的抗體比較好..XD(實話!) 03/30 23:30
推 hohotest:樓上abcam.... 04/02 18:35
推 greendeer:你的titer太高了啦，所以才那麼髒，做個稀釋吧 04/05 21:32
推 bigbear33:serum來源是甚麼物種 04/07 22:48
推 homeshawn:推三樓cover glass 05/29 03:25