作者imafsb (匿名)
看板Biotech
標題[求救] SDS-PAGE 的 running buffer
時間Thu Mar 28 00:32:35 2013
小弟是化工系的，最近想用SDS PAGE分離蛋白質然後定量
由於sample中的蛋白質總量很少(0.1 ug/ml)，所以使用SYPRO RUBY染色
放隔夜染色之後用10%酒精/7%醋酸洗30分鐘，就送去scaner讀了
不過做出來的結果，完全看不到蛋白質，marker條紋也很淡
據TechComm助理說應該不是染劑的問題，是膠有問題
但我確定我的seperating和stacking gel配方都對，
loading buffer用100 mM DTT幫助變性
唯一發現有錯是running buffer沒有加0.1% SDS
想請問這樣會有影響嗎？
另一個我想到的可能原因是，我染色前沒用fixation，這會是主要原因嗎？
感謝各位的幫忙!!
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◆ From: 140.112.61.143
→ trumpet:SDS一定要加 03/28 08:09
推 transmore:沒有SDS 就不叫SDS-PAGE了 03/28 13:10
推 martyrtitan:fix也要做 03/28 16:26
推 tinaminikimo:加油 至少你有想出原因 03/29 00:23
推 joseph103331:把東西確實操作一遍後再來做問題搜尋比較踏實 03/29 00:57
→ joseph103331:在"操作錯誤"上面打轉其實不好回答正確的問題 03/29 00:58
推 conective:SDS沒有加..... 03/29 11:06