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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 請問一下 現在有在做western blot 最終顯影的結果會有一片疑似泡泡的東西(但感覺不太像) 而且常常發生 如下網址↓↓↓↓ http://ppt.cc/JzU_ 而我認為是transfer的問題 因為每次transfer完後用Ponceau S染色就會看到那一片 奇怪的是 實驗室的學姊她做都不會發生這種事情 所有儀器、試劑都是用一樣的東西 難道是我本身的手法有問題嗎? transfer條件為(溼式, 400 mA, 1小時) 拜託各位高手 我已經困擾很久了 謝謝 剛剛transfer完染完Ponceau S又悲劇了→ http://ppt.cc/0nN0 我確定membrane和gel絕對沒有氣泡 我有多加一片海綿夾緊了還是這個樣子 不知道這是怎麼回事 唉~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.63.180
skybreeze:感覺是有東西擋道顯影或者是transfer 03/30 17:02
chench0710:membrane與gel之間的氣泡有趕乾淨嗎?? 03/30 17:55
yoke12071015:像氣泡 03/30 18:18
a90648:transfer氣泡沒趕乾淨,ECL上不均勻都有可能 03/30 18:19
mesenchymal:照你描述應該就是transfer時gel跟menbrane中間有氣泡 03/30 18:36
alulu:看起來不像泡泡 海綿用很久了嗎? 多加一片 這樣會夾緊一點 03/31 01:35
LUSRICH:應該是那個位置有一大團protein,反而起了blocking之效 03/31 03:00
LUSRICH:大大你若對照一下你的CBR圖(如果有)可能可以看出線索 03/31 03:01
LUSRICH:沒有做CBR的話membrane照完再泡CBR染也是可以~ 03/31 03:02
blence:都已經染了Ponceau S了還CBR 03/31 03:18
我確定membrane和gel之間的氣泡有趕乾淨,我有在猜想是不是將圖畫紙放在membrane上 後又產生氣泡,但是我無法看到氣泡(我還是有做趕氣泡的動作),請問這該如何改善? 小弟我本來認為是membrane有沾到什麼東西導致那一個區域無法transfer至membrane上。 to alulu:海綿用很久了,我會照你方法再試試 謝謝各位 ※ 編輯: ben00691206 來自: 122.117.13.40 (03/31 08:41) ※ 編輯: ben00691206 來自: 122.117.13.40 (03/31 08:42) ※ 編輯: ben00691206 來自: 122.117.13.40 (03/31 08:44)
skybreeze:放上圖畫紙後 我們前會用尺或者小滾輪來回滾 去除氣泡 03/31 16:36
※ 編輯: ben00691206 來自: 140.128.63.180 (03/31 20:53)
iceking:transfer溫度呢? buffer濃度呢? buffer有均勻嗎? 04/01 13:31
iceking:建議妳跟著學姊從頭到尾做一遍看看,哪些地方手法不同? 04/01 13:32
raiyu:建議直接求學姊看你作 會比你看學姊作來得容易抓錯 04/01 20:18
captdavince:想借問一下..我們的圖畫紙用久就很容易卡泡泡.大家也 04/01 23:05
captdavince:是這樣嗎?會大概重複用幾次呢? 04/01 23:05
iceking:圖畫紙我沒有在reuse的~ 04/02 12:05
usual:1.membrane染染看是不是真的有一團,如果沒有 04/02 17:17
usual:2.可能是加ECL時membrane上有泡泡,可以吸乾membrane再加 04/02 17:19
puec2:就是泡泡沒趕乾淨阿 如果你說你很確定沒氣泡 我想你要 04/04 19:40
puec2:改變你確定的方式 04/04 19:40
greendeer:你可以拿個塑膠管(吸管之類的),滾壓在膠上,這樣很有效 04/06 13:58
oldtain:請問原波一個基本但有點蠢的問題 你趕氣泡是泡在TRANSFER 04/09 01:15
oldtain:buffer裡面趕 還是放在空氣裡面貼上濾紙之後趕?? 04/09 01:16
michealking:membrane戳到也會這樣 04/12 15:40
keeny:我了解你的痛,我8年助理&PHD跑了近千片膠, 這應該是transfer 04/20 13:05
keeny:問題,我建議fully pre-soak海綿和filter paper杜絕氣泡 加油 04/20 13:07