Re: [求救] 請問螢光免疫染色時的背景值太高可能原因

[slimebox (我不是盒子)]

※ 引述《taiwanlin (Emma Lin)》之銘言：
請問大家一個問題,螢光免疫染色的背景值太高,除了是抗體稀釋倍數不當
以及blocking buffe的原因外,還會有什麼可能的原因嗎??
請大家提供我一些經驗參考一下,謝謝

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◆ From: 122.100.87.197
推 Solow:自體螢光也會干擾
→ vandia:wash不夠徹底也會...
推 lail:抗體專一性不夠(不論一抗二抗)

最近染螢光免疫染色也碰到相同問題(我用石蠟切片)
除了背景太高之外,切片邊緣部份顏色更深
有時連DAPI都染不上....

想請問大家wash都是用PBST浸泡還是要放shaker呢？



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◆ From: 1.34.125.25
※ 編輯: slimebox        來自: 1.34.125.25          (04/09 14:13)
※ 編輯: slimebox        來自: 1.34.125.25          (04/09 14:13)
推 puec2:浸泡就夠了
→ abcam:可以考慮使用Dako的抗體稀釋液..效果很好!
→ abcam:Wash的部份就一般的PBS..外面也是有在面washer buffer的!
→ abcam:石臘切片染色是種學問..可以問廠商解決問題 也比較快!
→ abcam:如果自己想太久 也是會瘋的!
非常感謝大家的回答!!!!!
※ 編輯: slimebox        來自: 1.34.125.25          (04/09 22:07)