推 puec2:Primer末端的cutting site有沒有多留幾個mer? 04/09 14:40
→ jeffsu:想問看看cutting site加幾個mer的意義是？? 04/09 17:20
推 qiet:要多留一些mer讓酵素有地方可以站上去在specific site作用 04/09 17:24
→ jeffsu:那加的mer有限定要ATGC哪種嗎 還是都可以 04/09 17:26
推 milkpa:看酵素datasheet裡面都有寫，要留幾個以上跟偏好的基都有 04/09 17:32
推 licat:看你的描述我可以想到好多可能的問題... 我覺得最快的方法是 04/09 21:57
→ licat:找一個你附近作cloning很順的人 跟他一步步確認你的做法 04/09 21:58
→ licat:最好是可以請他幫你做 全照他的方式來做 然後你在旁邊看跟學 04/09 21:58
→ blence:PCR產物有1ug以上,好奇你如何定量的,如果真用這麼多還做不 04/10 00:21
→ blence:出來,實在需要找個會做的人在旁指導了,不少描述都有問題 04/10 00:22
推 joseph103331:甚麼是直接純化.... 04/10 02:46
→ joseph103331:問一下 你選的位置應該沒有轉譯起始點吧? 04/10 02:47
→ mesenchymal:好巧不巧 這兩個酵素沒多留幾個mer切再久效率都很差 04/10 07:18
推 mesenchymal:看推文你似乎沒多放,所以先從這著手吧 04/10 07:21
→ jeffsu:這部分我們實驗室也算剛入門能問的人不多 很感謝大家的回答 04/10 10:45
→ jeffsu:我在研究看看 04/10 10:45
→ jeffsu:回j大 這段序列沒包含到轉譯起始點 04/10 10:56
→ jeffsu:不知道是不是需要包含到? 04/10 11:01
推 HEK293:做TA也是可以。 04/10 11:56
→ jeffsu:用pfx去PCR 好像不能用TA作的樣子 04/10 13:01
推 HEK293:加個a而已........= =做個tailing 04/10 13:38
→ jeffsu:瞭解了 感謝指導!! 04/10 16:23
推 chaunen:我覺得問題應該就是mesenchymal大大說的..Y 04/12 01:18
→ chaunen:所以inser其實沒有被切 也就接不上囉 04/12 01:19
→ chaunen:ligation product可以拿去跑PCR先check 很快就知道結果了 04/12 01:20
→ chaunen:cloning還是一步一步check比較能找出問題. 04/12 01:28